W Marvel's Spider-Man 2 gracze będą mogli doświadczyć Nowego Jorku Marvela zarówno jako Peter Parker, jak i Miles Morales.
Główny wątek fabularny gry pozwoli użytkownikom przejąć kontrolę nad oboma Spider-Manami w różnych momentach kampanii. W otwartym świecie gracze będą mogli eksplorować Manhattan, Queens i Brooklyn. Obie postacie Spider-Mana mają swoje własne historie i misje w świecie gry. Marvel's Spider-Man 2 zaoferuje obu kluczowym postaciom nowe umiejętności; Peterowi z symbiontem i Milesowi z jego ewolucyjnymi bioelektrycznymi mocami Venoma.